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HRGEC人肾小球内皮细胞培养方法

更新时间:2021-11-15

简要描述:

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培养工作中,主要从以下几个方面来预防细胞支原体的污染:

A. 控制环境污染

B. 严格实验操作

C. 细胞培养基和器材要保证无菌

D. 在细胞培养基中加入适量的抗生素

E. 避免细胞污染,可以从预防着手,超净工作台物品放置要合理、进入细胞房要换鞋和穿实验服、实验员戴手套后要用酒精等消毒、避免细胞交叉污染等等


传代方法:细胞完全汇合时,倒掉旧液,加入消化液(0.25%胰蛋白酶+0.03%EDTA)2ml消化,显微镜下观察细胞完全脱离瓶壁分离成单个细胞后弃掉胰酶,加培养基混匀分瓶,T25瓶中加培养基至6-8ml,T75瓶加培养基至20ml,37℃,5%CO2孵箱培养。


培养是生物学和医学研究zui常用的手段之一,可分为原代培养和传代培养两种。原代培养是直接从生物体获取细胞进行培养。由于细胞刚刚从活体组织分离出来,故更接近于生物体内的生活状态。这一方法可为研究生物体细胞的生长、代谢、繁殖提供有力的手段,同时也为以后传代培养创造条件。


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细胞复苏步骤:

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。


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