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如何巧妙利用血清培养细胞
发布时间:2019-02-15   点击次数:130次

在细胞培养实验室中,血清是常见的科研试剂之一,常见的血清种属有人的和动物两种,而动物的又分为牛、猪、鸡、羊等,根据客户对产品种属与来源的选择,价格也是不同的。对于实验新手来说,稍有不慎就会影响到实验结果,甚至让花费几千元买来的血清失去效果。那么我们要如何正确的使用与操作呢?今天上海晶抗与您探讨“如何巧妙利用血清培养细胞”。


    我们今天要说的血管平滑肌细胞培养采用的是贴块法,这种方法具有获得平滑肌细胞纯度高,量多,操作简便的优点。但用贴块法易使平滑肌细胞胞质内肌丝丧失,亚细胞器增加。 
        
    操作方法:动物经颈动脉放血后,在无菌操作下迅速取出胸腹主动脉段,置于含Hank's液的平皿中漂洗3次,将凝块洗干净后剥除外膜的纤维脂肪层,然后纵行切开血管,刮除内膜即内皮细胞迅速撕下中膜内、中层,切成约1mm宽的小条,浸泡在含血清的Hank's液中,并将撕下小组织块种植于培养瓶壁。置于37℃恒温箱,2h左右,取出培养瓶加入20%胎牛血清的培养液,再放回培养箱内静止培养4天。4天后可见细胞从组织中迁移游出。


    在这方法中,大家可要注意啦!不同动物血管结构有差异,猪和猴较易操作,但小动物如兔、鼠因其血管小,血管壁薄等特点,使之难以分离。另外组织块太薄,不易粘附培养基,也使细胞较难生长。


上海晶抗特别提示,实验中请注意:
1. 根据培养细胞的种属加入适量的不同血清,一般可加入胎牛血清,若小牛血清增殖效果差,应加胎牛血清(FBS),通常浓度为10%~20%。
2. 培养基的选择:常用的有DMEM,M199培养基。培养兔的平滑肌细胞用DMEM效果较好。
3. 种植组织块的数目,如75cm2的长颈瓶组织块不得少于30。

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