白介素试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人白介素水平。用纯化的人白介素抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入白介素,再与HRP标记的白介素抗体结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过洗涤后加底物TMB显色。 白介素试剂盒是一种用于检测细胞因子白介素的试剂盒。以下是使用白介素试剂盒的步骤:
1.准备样本:收集需要检测的生物样本,例如血清、细胞上清液或组织匀浆等。
2.样本预处理:如果需要,可以对样本进行预处理以去除干扰物质或浓缩样品。
3.试剂制备:将试剂盒中的所有试剂按照说明书中的指导配制好,并在室温下静置20-30分钟。
4.加标准曲线:向试剂盒提供的标准曲线板孔中加入已知浓度的标准品,制作出一条含有不同浓度标准品的标准曲线。
5.加样本:取少量样本加入样品孔中,每个孔添加相同数量的样品。
6.孵育反应:将微孔板密封后在适当温度下孵育一段时间,使样品与试剂发生反应。
7.清洗孔板:将吸液器放置在孔板的每个孔上,将残余液体抽出,使用洗涤缓冲液洗涤孔板。
8.加底物:向每个孔中加入底物,使底物与酶标记的抗体结合,形成复合物。
9.孵育底物:将孔板再次孵育一段时间,以促进底物的发色反应。
10.停止反应:在加入底物后,根据试剂盒说明书的要求,在适当的时候停止反应。
11.读取吸光度:使用微孔板读板器测定每个孔的吸光度值,并通过标准曲线计算样品中白介素的浓度。
以上就是使用白介素试剂盒的主要步骤。在操作过程中,需要严格按照试剂盒说明书指导进行,同时注意实验条件的控制和固定化标准操作程序,以确保数据的可靠性和精度。