有丝分裂。称作卫星细胞的肌原细胞，相互融合在一起，形成多核的肌管细胞(myotubue cell)。随着肌管细胞内肌原纤维的数量增加，肌管细胞成为骨骼肌细胞。成熟的骨骼肌细胞是一种有丝分裂后细胞，不能进行有丝分裂。
所以，虽然通过C6H15O12P3消化可进行传代3～4次，但如果发生分化，融合形成肌管，则很难再传代下去。同样，一旦细胞开始融合，细胞增殖也很难评估。
以下所述为肌肉活检组织酶消化法。来自健康人活检的初代培养材料，富含肌原细胞，初代培养在Ham12补加20%胎牛血清培养条件下，很易生长。
但原代骨骼肌细胞培养的难点就在于它的纯化，因为成肌细胞和成纤维细胞混杂生长很难区分。在常规培养条件下，这些细胞能够增殖和分化融合形成多核细胞的肌管，证明培养的细胞有成肌性。
【材料】
1.组织来源健康人肌肉活检组织。
2.培养用试剂
(1)培养液Ham F12。
(2)PBS。
(3)(Pronase)液：0.15%和0.03% EDTA，带有20U/ml和20 ug/ml的(0.4% Eurobio PES3000)，溶在100ml Ham F12或PBS中。
3.培养基配方和制备Ham F12加20%胎牛血清。
4.实验器材100um过滤网、手术刀、眼科剪、眼科镊、培养皿(切割用)、培养瓶、血细胞计数器和离心管。
【方法】
1.取材用剪刀剪除活检组织的非肌组织，用PBS抗生素缓冲液冲洗3次。按与肌肉纤维平行方向切割成小块，在称量之前用PBS冲洗3次。把组织小块摆放在平皿上，切成lmm3大小的碎块，不要挤压造成伤害，用PBS冲洗3次，弃掉上清。
2.消化在37℃液中消化1小时(1～3mg组织需要15 ml消化液)，每3～5分钟摇晃或吸管吹打使细胞分离。用吸管吹打消化物，使更多的细胞分散下来，培养液应变得越来越浑浊。加入含20%胎牛血清的生长培养基终止消化，让组织块慢慢沉到管底。
3.分离细胞集合所得上清液，用100um过滤网滤过入20ml离心管中，进行800r/min离心8～10分钟，吸出上清液弃掉。加10ml生长培养液重悬沉积物，用吸管轻轻吹打，然后用计数器计数细胞。
4.接种与培养用生长培养基稀释悬液，接种入培养瓶中，细胞密度1.5x104个/ml。把培养瓶置入37℃,5% CO2细胞培养箱中培养。
【结果】
体外培养的骨骼肌细胞，经显微镜鉴定，刚分离出的原代细胞比较小，呈球形，折光性强。12小时后，细胞开始贴壁，72小时后贴壁，贴壁后绝大多数逐渐延展成为梭形，少数有突起，为不规则状，换液可在培养3天后进行，随着培养时间的延长，细胞增殖、迁移并逐渐规律性地沿一个方向排列。
一旦细胞长满整个培养瓶，产生接触抑制，增殖将明显受到抑制，表现为相邻细胞相互融合，形成肌小管，即表现出分化倾向。
初始形成的肌小管的多个细胞核沿细胞中心排列，形成中心核链，而合成的少量肌原纤维则位于周边。随着分化的继续，肌原纤维大量生成，逐渐占据细胞中的部位，迫使中心核链的核移向周边，即形成幼稚肌纤维。另外还可以用组织块法培养，约1周可见组织块周围有梭形的细胞爬出，但只是部分组织块周围有细胞。
透射电镜下观察，分裂增殖早期的骨骼肌细胞核含核仁1～3个，细胞质中有不规则分布的束状平行排列的肌丝，部分区域肌丝尚未形成，并有少量幼稚线粒体。
早期细胞内有长梭形高电子密度结构，呈散在分布;晚期细胞胞质肌丝更丰实，但无明显肌节形成，可见分化较成熟的线粒体、糖原和游离核糖体聚集于肌束周边，使丰实的肌丝呈束状平行排列。
