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ELISA试剂盒常用方法的优缺大总结
更新时间:2018-03-19   点击次数:992次

ELISA是一种广泛应用在测定液体样本中的蛋白、抗体、或激素的免疫剖析技能。酶联免疫吸附实验的规范程序,通常是把蛋白、抗体、或激素等(即抗原)直接或是以捕捉抗体(capture Ab)固定在固相载体上,再参加一级检测抗体(primarydetection Ab),形成一个抗原抗体的复合物。假如该抗体现已用酶(enzyme)符号了,即可用来直接测定抗原的量,若无,则可使用另一个酶符号的二级抗体来测定抗原的量。测定抗原量的办法是参加该酶的底质(substrate),作用后发作呈现的色彩深浅和样本中的抗原量呈正比的,依此原理计算出样本中的抗原总量或浓度。

信任经常用elisa试剂盒做实验的科研朋友都知道,有四种常用的办法来检测,分别是直接法、间接法、双抗体夹心法和竞赛法及*新ELISA技能--依据细胞法。今天上海基免就带您了解它们的优缺陷!
1.双抗体夹心法(sandwich ELISA)
被检测的抗原包被在两个抗体之间,其间一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶符号后直接测定抗原的量;或不符号,再透过酶符号的二级抗体来测定抗原的量。这两种抗体有必要当心选取,才可防止交互反响或竞赛相同的抗原结合部位。
优势:高灵敏、高专一性,抗原无须事前纯化。
缺陷:抗原必定得拥有两个以上的抗体结合部位。
2.竞赛法(competitive ELISA)
样本里的抗原(自在抗原)和纯化并固定在固相载体上的抗原(固定抗原)一起竞赛相同的抗体,当样品里的自在抗原越多,就能够结合越多的抗体,而固定抗原就只能结合到较少的抗体,反之亦然。经清洗过程,洗去自在抗原和抗体的复合物,只留下固定抗原和抗体的复合物,拿来与只要固定抗原的对照组成果相比较,依据呈色差异就可计算出样品里的抗原含量。
优势:可适用比较不纯的样本,并且数据再现性很高。
缺陷:整体的敏感性和专一性都较差。
3.新ELISA技能--依据细胞法(cell-based ELISA)
依据细胞法是一种新的定性蛋白检测技能,将细胞直接在微孔板里培育,待检测时,不需抽提蛋白和裂解细胞,便可直接丈量微孔板里蛋白经影响或抑制作用后的改变。
优势:无需裂解细胞,所以方针蛋白丢失*少,可测定完好细胞、黏附细胞、还有非粘附细胞。
缺陷:不能测定抗原量。
4.直接法(direct ELISA)
将抗原直接固定在固相载体上,参加酶符号的一级抗体,即可测定抗原总量,此一级抗体的特异性非常重要。
优势:操作手续简短,因无须使用二抗可防止交互反响。
缺陷:实验中的一抗都得用酶符号,但不是每种抗体都适合做符号,费用相对提高。
5.间接法(indirect ELISA)
此测定办法与直接法相似,不同在于一级抗体没有酶符号,改用酶符号的二级抗体去辨识一级抗体来测定抗原量。
优势:二抗能够加强信号,并且有多种挑选能做不同的测定剖析。不加酶符号的一级抗体则能保存它*多的免疫反响性。
缺陷:交互反响发作的机率较高。

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