ELISA试剂盒荧光标记是研究细胞凋亡的zui基本方法。细胞凋亡的形态学变化及生化学变化都可以通过荧光标记的的方法而检测出来,从而区别鉴别出正常细胞、凋亡细胞、坏死细胞以及不同凋亡时期或细胞周期。
碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种DNA结合性染料,其激发和发射波长分别为536nm617nm,产生红色荧光,但无膜通透性,不能透过活细胞膜,只能染死细胞。因此,在荧光显微镜下观察,正常细胞不能着色,早期凋亡细胞呈微弱红光,晚期凋亡细胞红光加强,坏死细胞呈强红色荧光。采用流式细胞仪检测细胞周期时,凋亡细胞因内源性核酸酶被激活,使DNA广泛降解、断裂,DNA结构发生剧变,随着凋亡的进程,DNA断裂产生的小分子量DNA溢出胞外,细胞总DNA量降低,于正常G0/G1细胞群前出现一DNA低染细胞群,即G1峰前出现亚二倍体峰(sub-G1)或称A0细胞群,即凋亡细胞群。
用本ELISA试剂盒的PI直接对细胞DNA染色后,进行流式细胞仪分析,即可检测到凋亡细胞DNA的变化。