上海晶抗生物牛白介素12B(IL12B)ELISA试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（Sandwich ELISA），用于定量检测牛血清、血浆等生物样本中的IL12B（又称 IL-12 p40 亚基）含量。

一、核心原理

利用抗原 - 抗体特异性结合与酶促显色反应，通过“夹心"结构捕获目标物，并将其浓度转化为可测量的光信号。

固相捕获：酶标板微孔内预包被高特异性的抗牛 IL12B 捕获抗体。

样本结合：加入待测样本（或标准品），其中的牛IL12B抗原与捕获抗体特异性结合。

检测抗体结合：加入标记的检测抗体，识别并结合已捕获的IL12B抗原，形成“捕获抗体-IL12B-检测抗体"的夹心复合物。

酶联放大：加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素，亲和素与高亲和力结合，将酶连接到复合物上。

显色定量：加入TMB 底物，HRP 催化底物显蓝色；加终止液（硫酸）后变黄。

信号读取：酶标仪测450nm吸光度（OD 值），OD值与IL12B浓度正相关。

二、完整实验流程

加样：加入标准品/样本→温育（抗原-捕获抗体结合）→ 洗涤去未结合物。

加检测抗体：加入标记检测抗体→温育（形成夹心）→ 洗涤。

加酶结合物：加入HRP-亲和素→温育→洗涤。

显色：加TMB底物→避光温育显色。

终止与读数：加终止液→测OD450值。

计算：标准曲线拟合→计算样本IL12B浓度。

三、关键特点

特异性：双抗体精准识别牛IL12B，交叉反应低。

灵敏度：检测限通常 <10pg/mL。

定量：OD值与浓度线性相关，结果精准。

通用：适用于血清、血浆、细胞上清等。

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