上海晶抗生物猴Ⅲ型前胶原肽P亚NP(PⅢNP)ELISA试剂盒采用双抗体一步夹心法，通过抗原 - 抗体特异性结合与酶促显色反应，实现对猴样本中 PⅢNP 的定量检测。

一、核心原理总览

试剂盒微孔板预先包被PⅢNP捕获抗体。样本 / 标准品中的PⅢNP与捕获抗体结合，再与HRP 标记的检测抗体形成 “捕获抗体-PⅢNP-酶标检测抗体" 夹心复合物。洗去未结合物后，加入 TMB底物显色，颜色深浅与PⅢNP浓度正相关。酶标仪测450nm吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样本中PⅢNP含量。

二、详细实验步骤与原理

固相包被：酶标板微孔已预包被高特异性抗猴PⅢNP捕获抗体，通过物理吸附 / 化学偶联固定于固相表面，形成捕获相。

加样与孵育

标准品孔：加入系列浓度PⅢNP标准品（如 5000、2500、1250、625、312.5、156.25 pg/mL）。

样本孔：加入待测样本（血清、血浆、组织匀浆等）。

所有孔（空白除外）加入HRP标记的PⅢNP检测抗体，37℃孵60分钟。样本 / 标准品中PⅢNP 同时与固相捕获抗体、液相酶标检测抗体结合，形成夹心免疫复合物。

洗板：充分洗涤5次，去除未结合的酶标抗体及杂质，降低非特异性背景。

底物显色：加入TMB底物A、B，37℃避光孵育15分钟。HRP催化TMB由无色变为蓝色，显色强度与复合物中HRP量（即PⅢNP量）成正比。

终止反应：加入终止液，蓝色转为黄色，终止酶促反应。

检测与定量：酶标仪测 450nm OD值。以标准品浓度为横坐标、对应OD值为纵坐标绘制标准曲线，样本 OD 值代入曲线，计算 PⅢNP浓度。

三、关键技术要点

特异性：双抗体识别PⅢNP不同表位，确保仅结合目标分子，减少交叉反应。

灵敏度：HRP 酶促放大信号，可检测低至 pg/mL 级 PⅢNP。

定量依据：OD 值与 PⅢNP 浓度在试剂盒检测范围内呈良好线性关系。
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