HSC-T6细胞是大鼠肝星状细胞系，广泛应用于肝纤维化机制研究、药物筛选等生物医药领域，其培养过程对环境、试剂、操作规范要求严苛，任何环节的疏漏都可能导致细胞污染、生长异常或功能改变，影响实验结果的可靠性。下面结合实操经验，详细梳理HSC-T6细胞培养的关键步骤，解析培养过程中常见问题及解决方案，为科研人员提供标准化、可落地的培养参考，助力实验高效开展。

　　HSC-T6（大鼠肝星形细胞）细胞培养的关键步骤，需贯穿“准备-接种-培养-传代-冻存”全流程，每一步都需严控细节。前期准备是基础，需搭建无菌环境，对培养皿、离心管、移液管等耗材进行高压蒸汽灭菌，超净工作台用紫外灯照射30分钟消毒，同时检测试剂有效性——培养基选用含10%胎牛血清、1%双抗的DMEM高糖培养基，胎牛血清需筛选无支原体、低内毒素批次，双抗可有效预防细菌污染。细胞复苏环节，将冻存管从液氮中取出后，迅速放入37℃水浴锅快速解冻（1-2分钟），解冻后离心去除冻存液，用新鲜培养基重悬细胞，轻柔吹打避免细胞损伤，随后接种至预温的培养皿中，置于37℃、5%CO₂培养箱中静置培养。
 

　　细胞培养与传代是维持细胞活性的核心。培养期间需每日观察细胞状态，包括形态、密度及有无污染：正常HSC-T6细胞呈梭形或多边形，贴壁生长，边界清晰；若发现细胞形态变圆、漂浮增多，可能是营养缺乏或污染前兆。当细胞密度达到70%-80%时，需及时传代，避免细胞过度融合导致生长停滞——传代时先用PBS缓冲液冲洗细胞2次，加入消化液（0.25%-EDTA），37℃孵育1-2分钟，显微镜下观察到细胞皱缩、脱落时，加入新鲜培养基终止消化，离心后重悬细胞，按1:3比例接种至新培养皿，补充培养基后继续培养。

　　细胞冻存是长期保存细胞的关键，需兼顾细胞活性与复苏效率。冻存时选用含10%二甲基亚砜（DMSO）、90%胎牛血清的冻存液，DMSO可减少细胞内冰晶形成，避免细胞损伤；将对数生长期的细胞消化、离心后，用冻存液重悬，调整细胞浓度至1×10⁶-1×10⁷个/mL，分装至冻存管中，采用梯度降温法冻存（4℃放置30分钟，-20℃放置1小时，-80℃过夜，次日转入液氮长期保存），避免温度骤变损伤细胞。

　　结合实操经验，解析HSC-T6细胞培养常见问题及解决方案。一是细胞污染，分为细菌污染（培养基浑浊、有异味）和真菌污染（出现白色絮状物），预防核心是严控无菌操作，污染后可根据污染类型加入对应抗生素处理，严重污染时需丢弃细胞，消毒培养环境。二是细胞贴壁不良，多因培养基营养不足或培养皿未包被，可缩短消化时间、更换新鲜血清，必要时用明胶包被培养皿提升贴壁率。三是细胞生长缓慢，可能是培养温度、CO₂浓度异常或细胞密度过低，需校准培养箱参数，保证37℃、5%CO₂稳定，传代时适当提高接种密度。

　　综上，HSC-T6（大鼠肝星形细胞）细胞培养的核心是“无菌操作、精准控温、规范流程”，关键步骤的细节把控的与常见问题的及时处置，是保障细胞活性与实验可靠性的基础。科研人员需严格遵循标准化培养流程，结合细胞生长状态动态调整操作细节，才能获得形态均一、活性稳定的HSC-T6细胞，为肝纤维化相关研究提供可靠的细胞模型。