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晶抗生物牛ELISA试剂盒的基本操作步骤如下
更新时间:2024-10-14   点击次数:249次

今天为大家讲述晶抗生物牛ELISA试剂盒的基本操作步骤如下

晶抗生物牛ELISA试剂盒的基本操作步骤如下

准备工作:

试剂准备:从冷藏环境中取出试剂盒,室温(20-25℃)放置 30 分钟左右,让试剂恢复到室温。同时按照说明书的要求准备好各种试剂,如洗涤液可能需要进行稀释等。

样本准备:采集的牛血清、血浆或其他相关液体样本,按照规定的方法进行处理和保存。例如,血清样本可于室温放置 2 小时或 4℃过夜后于 1000xg 离心 20 分钟,取上清液用于检测;血浆样本可用 EDTA 或肝素作为抗凝剂,标本采集后 30 分钟内于 2-8℃、1000xg 离心 15 分钟,取上清液备用。

加样:

分组:取出 96 孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组(一般有 6 个浓度梯度)、空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂)、待测样品组。为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。

加样操作:依照标准品的顺序分别加入适量的标准品溶液于空白微孔中,空白对照孔加入等量的蒸馏水或相应的空白对照液,其余微孔中加入处理好的待测样本。加样时应将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

温育:

用封板膜封板后,将酶标板放入湿盒内,根据试剂盒说明书的要求在特定温度(通常为 37℃)下恒温孵育一定的时间(一般为 1 小时左右,但不同的试剂盒可能有不同的要求)。在温育过程中,要确保温度的准确性和稳定性,避免温度波动对实验结果造成影响。

洗涤:

小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干。每孔加满洗涤液,静置 15-30 秒后弃去,如此重复多次(一般为 5 次),最后用吸水纸拍干。洗涤过程要充分,以确保去除未结合的物质,避免对后续的检测产生干扰,但也要注意避免过度洗涤导致样本损失。

加酶标溶液:

除空白对照孔外,向标准品组和待测样本组的各孔中加入适量的酶标溶液。加酶标溶液时要注意操作的准确性,避免加样误差。

再次温育:同第 3 步的温育操作,再次进行温育,使酶标溶液与样品充分反应。

显色:

各孔加入显色剂 A 液,再加入显色剂 B 液,轻轻震荡混匀。然后在特定温度(如 25-37℃)下避光反应一定时间(一般为 10-15 分钟),此时孔内的颜色会发生变化。

终止反应:

加入终止液,终止反应(此时颜色通常会由蓝色立转黄色)。终止液的加入量要准确,并且要迅速、均匀地加入,以确保反应能够及时终止。

读板:使用酶标仪在特定波长(一般为 450nm)下读取各孔的吸光度(OD 值)。

结果分析:根据标准品的 OD 值绘制标准曲线,然后根据待测样品的 OD 值在标准曲线上查出相应的浓度,再乘以稀释倍数(如果在加样前对样品进行了稀释),即为样品的实际浓度。

上海晶抗生物一直致力于为广大高校、科研院所和企事业单位提供的牛ELISA试剂盒科研试剂和完善的技术服务,满足生物化学、分子生物学、细胞生物学、免疫学等生物科技实验需求。

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