使用动物elisa试剂盒前，将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫，以免加样时加入大量的气泡，产生加样上的误差。
 

　　根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定，能使用复孔的尽量做复孔。
 

　　加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul的生物素标记的抗体。盖上膜板，轻轻振荡混匀，37℃温育1小时。
 

　　甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
 

　　每孔加入80ul的亲和链酶素-HRP，轻轻振荡混匀，37℃温育30分钟。
 

　　甩去孔内液体，每孔加满洗涤液，振荡30秒，甩去洗涤液，用吸水纸拍干。重复此操作3次。如果用洗板机洗涤，洗涤次数增加一次。
 

　　每孔加入底物A、B各50ul，轻轻振荡混匀，37℃温育10分钟。避免光照。
 

　　取出酶标板，迅速加入50ul终止液，加入终止液后应立即测定结果。
 

　　在450nm波长处测定各孔的OD值。
 

　　动物elisa试剂盒应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃，不可保存。实验中不用的板条应立即放回包装袋中，密封保存，以免变质。不用的其它试剂应包装好或盖好。
 

　　不同批号的试剂不要混用。保质前使用。使用一次性的吸头以免交叉污染，吸取终止液和底物A、B液时，避免使用带金属部分的加样器。使用干净的塑料容器配置洗涤液，使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品
 

　　洗涤酶标板时应充分拍干，不要将吸水纸直接放入酶标反应孔中吸水。底物应挥发，避免长时间打开盖子。底物B对光敏感，避免长时间暴露于光下。实验完成后应立即读取OD值。加入试剂的顺序应一致，以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。