一、复苏

    
1.把冻存管从液氮中取出来，当即投入37℃水浴锅中，细微摇摆（留意防止盖子不紧致使液体进入冻存管）。液体都消融后(大概1-1.5分钟)，拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

    
2.把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍，把粘在壁上的细胞都洗下来)，1000转离心5分钟。
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3.把上清液倒掉，加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇摆，使培养皿中的细胞均匀分布。

    
4.标好细胞品种和日期、培养人姓名等，放到37℃的5%CO2培养箱中培养，细胞贴壁后换培养基。

    
5.依据细胞增长速度2-3天换一次培养基。
 
    
二、传代

    
1.培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

    
2.把原有培养基吸掉。

    
3.加恰当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行)，消化1-2分钟。

    
4.细胞都变圆后参加等体积的含血清的培养基终止消化。

    
5.用移液枪吹打细胞，让细胞悬浮起来。

    
6.把细胞吸到10ml或15ml的离心管中，1000转离心5分钟。

    
7.倒掉上清液，加1-2ml培养基，把细胞都吹起来。

    
8.依据细胞品种把细胞传到几个培养皿中。一般，癌细胞分5个，正常细胞传3个。持续培养。
 
    
三、冻存

    
把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来，分装到灭菌的冻存管中，静止几分钟，写明细胞品种，冻存日期。4℃30min，-20℃30min，-80℃过夜，然后放到液氮灌中保存。

    
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