细菌抗酸染色法
1、原理与应用
结核分枝杆菌对苯胺染料一般不易着色，若加温或延长染色时间使其着色后，再用3%盐酸酒精处理也不易脱色，经此染色后，结核分枝杆菌及其他分枝杆菌呈红色，而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色。
2、材料
(1)结核病人痰
(2)抗酸染色液
(3)玻片、片夹、滤纸片、竹签、空平皿、污物盆。
3、方法
(1)取洁净的竹签沾取痰中血丝或脓性痰，在清洁无油脂玻片上涂开。涂抹区约拇指盖大。用过的竹签放到空平皿内待高压灭菌。
(2)涂片自然干燥后，用片夹挟住玻片一端，通过火焰固定。
(3)涂抹面用滤纸片盖上，然后往滤纸片上滴加石炭酸复红染液，使滤纸片*被染液浸湿，持玻片在小火上加温片刻然后离开火焰，此时可见到玻片上冒出蒸气。待蒸气消失后再加温，如此反复3～4次，约5min，加温时随时添加染液勿使纸片干涸。
(4)玻片冷却后，用接种环挑去滤纸扔到污物盆内，流水冲洗玻片。
(5)滴加3%盐酸酒精脱色，至涂抹均匀部位基本没有红色再脱下为止，水洗。
(6)滴加吕氏美蓝染液30sec，水洗。
(7)吸干、镜检。
4、溶液配制
萋－尼(Zichl-Neelsen)抗酸染色液
(1)石炭酸复红液：硷性复红4g，溶于95%酒精100ml，作成饱和溶液，再取该饱和液10ml与5%石炭酸溶液90ml混匀即成。
浓盐酸3ml加入95%酒精97ml中即成。
(3)吕(Loeffer)氏美蓝染色液
美蓝2g，溶于95%酒精100ml中，作成饱和液。再取该饱和液30ml与0.01%氢氧化钾水溶液100ml混合均匀即可。
细菌奈瑟染色法
1、材料
(1)染液甲
液：美兰1g，95%酒精30ml，冰醋酸50ml，蒸馏水100ml。
第二液：结晶紫1g, 95%酒精10ml, 蒸馏水300ml。
以上液二份，与第二液一份混合之。
(2)染液乙，黄叱精1或2g，热蒸馏水300ml，待溶解后过滤。
2、染色法
(1)涂片按常规法固定后，滴加奈瑟染液甲液数滴于涂片上，15～30 Sec，水洗。
(2)用奈瑟染液乙液复染10～30秒钟。
(3)迅速用水洗，吸干、镜检。
3、结果
菌体呈鲜明、异染颗粒呈深紫兰色。
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