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ELISA实验背景深全部呈有色原因及解决办法
更新时间:2019-12-09   点击次数:803次

ELISA试剂盒实验中,背景深,全部呈有色(通常的Elisa背景值OD<0.2)
根据技术分析,可能存在的原因有一下几条:

1、实验过程中洗涤不充分,洗后未拍干,样品中其它成分残留或酶标记物残留
  解决办法:洗液准确配制;充分洗涤,静置15秒,*拍干。加样或加酶拍板的滤纸应弃去不用,不要反复使用,否则易造成污染。

2、底物污染,未避光保存,出现颜色
  解决办法:弃去底物,重新配置

3、样品稀释液污染
  解决办法:弃去稀释液,重新配置

4、吸头重复使用,未洗净或消毒不*
  解决办法:吸头尽可能一次性使用

5、没有正确封闭
  解决办法:在标准品稀释液中加入动物蛋白或延长封闭时间

6、样本溶血严重
  解决办法:建议使用非溶血或轻微溶血样本,严重溶血样本会导致背景偏高。

7、不正确的孵育时间,温度(尤其是底物孵育的时间)
  解决办法:zui为常用的温育温度有37℃和室温,其次是43℃和2~8℃。*按照说明书要求

8、偶联抗体(streptavidin-HRP)浓度过高
  解决办法:按照说明书调整到合适的浓度

9、ELISA板子不正确的贮存
  解决办法:酶标板贮存于2-8 ℃;使用结合力低点的Elisa板

 

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