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淀粉酶活力测定具体操作方法
发布时间:2019-07-03   点击次数:121次

淀粉酶活力测定具体操作方法

淀粉酶原理

淀粉被淀粉水解,切断淀粉链的α-1,4糖苷键,对dian呈蓝紫色的反应消失,这种呈色消逝的速度可以表示水解的程度,因而能衡量酶的活力。

试剂和器材

一、试剂
(1)dian原液:称取dian11克,dian化钾22克,加水溶解,稀释至500毫升。
(2)稀dian液:取dian原液2毫升,加dian化钾20克,稀释至500毫升,此试剂随配随用。
(3)2%淀粉液:称取干燥过的可溶性淀粉2克,加5毫升蒸馏水,搅拌混和,再徐徐倾入70毫升煮沸的蒸馏水中。继续煮沸2分钟,冷却至室温,加入磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(PH为6)
(4)柠檬酸缓冲液:称取磷酸氢二钠(Na2HPO4·12H2O)45.23克,柠檬酸(C6H8O7·H2O)8.068克,加水溶解,稀释至1000毫升。
(5)标准比色液:称取氯化钴(CoCL2·6H2O)25克和重铬酸钾3.34克溶于100毫升0.01N HCL,其五倍稀释作标准。
(6)样品:细菌-α淀粉酶

二、器材
(1)电热恒温水浴 (2)试管
(3)量筒 (4)吸量管(1ml)

淀粉酶操作方法
1、取试管1支,加20毫升2%淀粉,混匀,在30℃水浴中,使管内温度达到30℃。
2、将淀粉酶0.5ml加到30℃的淀粉液中,混匀,在30℃水浴中保温,自加入记时,经5 分钟后取反应液1毫升,加入盛有5毫升稀dian液的试管中。混匀,目测比色,每隔一定时间重复测定,直至呈色与标准比色颜色相同为止,记录反应进行的时间。
3、计算。在上述条件下,每一小时催化1毫升2%可溶性淀粉水解的酶量,定为一个酶活力单位。

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