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ELISA试剂盒的测定原理
更新时间:2018-05-08   点击次数:797次

elisa测定试剂盒基本原理及注意事项
⒈ 正式实验时,应分别以阳性对照与阴性对照控制实验条件,待检样品应作一式二份,以确保实验作用的性。有时本底较高,阐明有非特异性反应,可选用羊血清、兔血清或BSA等关闭。
⒉ 在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很首要的,其间包括:
a, 固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纤维素等。其方法可所以凹孔平板、试管、珠粒等。其时常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何种载体,在运用前均可进行选择:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,查询其显色反应是不是均一性,据此判明其吸附功用是不是超卓。
b ,酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择央求是价廉、安全、有明显地显色反应,而自身无色。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应留神防护。有条件者应运用不致癌、灵敏度高的供氢体,如TMB和ABTS是其时较为满足的供氢体。底物作用一段时间后,应参与强酸或强碱以连续反应。一般底物作用时间,以10-30分钟为宜。底物运用液有必要新鲜制作,尤其是H2O2在临用前参与。①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并坚持其免疫活性。
c,包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,央求纯度要好,吸附时一般央求PH在9.0~9.6之间。吸附温度,时间及其蛋白量也有必定影响,一般多选用4℃18~24小时。蛋白质包被的zui适浓度需进行滴定:即用不一样的蛋白质浓度(0.1、1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它实验条件相一起,查询阳性标本的OD值。选择OD值zui大而蛋白量zui少的浓度。关于大都蛋白质来说一般为1~10μg/ml。
d, ELISA试剂盒酶符号抗体作业浓度的选择:首先用直接ELISA法进行开始效价的滴定(见酶符号抗体部份)。然后再固定其它条件或选用“方阵法"(包被物、待检样品的参看品及酶符号抗体分别为不一样的稀释度)在正式实验体系里地滴定其作业浓度。

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