CD40
该试剂盒以 HRP标记的链霉亲和素复合物（HRP Streptavidin Conjugate，
HRP-SA）为基础，可用于检测血液,细胞、组织
CD40抗原。该试剂盒
、特异性强、定性定位 、背景清晰。在所用的 CD40一抗与相
，用生物化二抗与一抗特异性 ，zui后加 HRP-SA，形成抗
应靶抗原
原—特异一抗—生物素化二抗—HRP-SA复合物，显微镜下观察成像。
试剂盒所含试剂：
试剂A 通透液：0.1% Triton-X 100 10 mL（选用）
试剂B 封闭
试剂C （*分装）已稀释的即用型一抗（2.5ml）
试剂D （*分装）生物素化 IgG 1支
（浓度1.5 mg/mL，稀释 1:300~1:500）50 μL+抗体稀释液20ml
（封闭用） 20 mL
试剂E HRP-SA复合物1支（浓度1 μM，稀释 1:50~1:200）100 μL
试剂F DAB显色液 5ml
用户自备试剂：
1． 10mM TBS（pH7.2~7.4）
三
1.21g
7.6g
加蒸馏 800mL，浓盐酸调pH值至7.2~7.4，zui后定容至1000mL
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%体积 ）
2．抗原修复液（依检测抗原不同而选择不同的修复液）
10mM pH6.0 柠檬酸
柠檬酸0.38g
柠檬酸三钠2.45g
加蒸馏 900mL，浓盐酸调pH值至6.0，zui后定容至1000mL
或：0.5M EDTA修复液（pH8.0）
EDTA·2H2O 186.1g
加蒸馏 700mL，用10mM NaOH调pH值至8.0，zui后定容至1000Ml
3.
10 mL
4. Tween 20 5 mL
石蜡包埋组织切片
实验步骤（建议方案）：
石蜡包埋组织切片3~4μm 厚度
1.烤片： 将待做切片
，于60℃恒温烤箱中至少烤1 hr；
3次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
2.脱蜡： 切片放
10 min；
3. ： 切片经下行酒精 ，无
乙醇2 min；75%乙醇2min，自来
5min，95%乙醇2次（每次2min），85%
，ddH2O洗2×2min；
4.抗原修复： 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复，常采用高压、微波（温
度达到98~100℃）或酶消化修复法，室温自然 ，自来
2min，TBS洗涤（2×2min）（
5步封闭。
5.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育30 min；
，ddH2O洗2×
1）* 注：有些抗原勿需修复，
直接进
6.加一抗：滴加用试剂C（即用型一抗），37℃湿盒孵育2 hr 或4℃过夜；
7.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min）；
8.封闭： 滴加试剂B，37℃湿盒孵育10 min；
9.加二抗： 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗（试剂D），37℃湿盒中孵育
30 min；
10.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min）；
11.封闭： 滴加试剂Tween 20，37℃湿盒孵育封闭20 min；
12.加HRP-SA： 滴加用试剂C稀释的试剂E（1：50~200，终浓度5~20 nM），37
℃湿盒中孵育30 min；
13.洗涤： TBS-T洗涤（3×5 min），TBS洗涤（2×5 min）；
14.显色：应用DAB溶液（试剂F）显色；
15.复染：自来
，复染，脱 ，透明；
16.封片： 待组织标本干后，用试剂
封片；
17.观察成像： 显微镜下观察成像。
注意事项：
1. 修复后
，自来
，骤
。
2.
，用过的柠檬酸
用。
3. 若试剂为微量浓 ，用前应低速离心，将
着的溶液离到底部。
4. 封片前一定要换用TBS
，以便洗去组织上残留的Tween 20，否则会
影响
。
5. 如须复染细胞核，则在封片前复染或直接采用含有染核试剂的封片剂进行封
片。
附1：
抗原修复方法
常用抗原修复液：柠檬酸
9.0）等等。
（0.01M pH6.0）、EDTA 抗原修复液（pH8.0 或
，在组织上滴加胃蛋白酶或胰蛋白酶，37℃孵育
。
，将脱蜡
一、酶消化修复法
切片脱蜡
，TBS
20~30min后TBS
二、微波抗原修复法
微波盒中加
切片架上，放
，中档或
10~15min，取出微波
盒
，自来
，取出切片。因不同微波炉微波处理时间存在差异，
须自行调整。
三、直接高压抗原修复法
取修复液于不锈钢高压锅中加热至 ，将组织切片
，修复
液
然
，盖上锅盖，待喷
1.5~2.5min即可脱离热源，自
，取出切片。此方法适用于较难检测或核抗原的修复。
四、隔
不锈钢高压锅中加自来
腾，将切片放
，微波盒中加
于微波炉中加热至
，待喷
，
4~8 min即可
，自然
，取出切片。此方法适用
于较难检测或核抗原的修复。
